Руководство ВОЗЖ по диагностическим тестам (Terrestrial Manual, гл. 1.1.6) называет шесть самых частых назначений лабораторного теста:
Набор валидируют под назначение, вид животных и тип пробы. Это относится и к лабораторным методам, и к экспресс-тестам у животного.
Разные цели требуют разных свойств теста. Скрининг применяют к здоровому поголовью, поэтому от него ждут высокой диагностической чувствительности: пропустить заражённое животное дороже. Подтверждающий тест решает обратную задачу – снизить долю ложноположительных результатов. Отсюда частая схема: чувствительный скрининг, затем специфичное подтверждение. При оценке поствакцинального иммунитета ложноположительный результат особенно опасен: животное сочтут защищённым, хотя иммунитета у него нет.
ПЦР выявляет участок генома возбудителя. Это прямой метод: он отвечает на вопрос, есть ли в пробе генетический материал. Отсюда важное следствие. ПЦР находит последовательности и живых, и погибших микроорганизмов, пока нуклеиновая кислота сохраняется в пробе. Посеву для роста нужен живой возбудитель.
Перед реакцией нуклеиновую кислоту выделяют из клинического материала отдельным набором. ВОЗЖ советует выбирать метод экстракции заранее: при больших потоках проб автоматическая экстракция может оказаться необходимой.
Высокая аналитическая чувствительность амплификации создаёт и риск. Перенос ампликонов от пробы к пробе даёт ложноположительные результаты. ВОЗЖ рекомендует разделять этапы по помещениям или боксам, менять халаты и перчатки, вести программы уборки.
Результат читают вместе с контролями:
Ингибиторы чаще встречаются в фекалиях и сперме, в крови – реже. Клоакальные пробы содержат их чаще, чем пробы из ротовой полости.
ИФА выявляет антитела или антигены в сыворотке, плазме крови и других пробах. Метод применяют для серологического мониторинга поголовья, скрининга и оценки иммунитета после вакцинации.
Форматы различаются тем, что сорбировано на планшете и чем ловят искомое:
| Формат | Как устроен | Где удобен |
|---|---|---|
| Непрямой | связанные антитела пробы выявляют антивидовым конъюгатом | скрининг больших количеств проб; один набор рассчитан на один или несколько видов животных |
| Конкурентный (блокирующий) | антитела пробы конкурируют с меченым антителом за антиген на планшете | виды, для которых нет антивидовых конъюгатов; сыворотку берут в низких разведениях, меньше помех от неспецифического связывания |
| Сэндвич | антиген удерживает сорбированное антитело-ловушка | крупные антигены и сложные белки; ограничение формата – у антигена должно быть не меньше двух антигенных участков |
ИФА на антиген и ПЦР решают общую задачу – найти самого возбудителя. У тестов на антиген и возбудителя диагностическое окно обычно заметно уже, чем у тестов на антитела: иммунный ответ держится дольше, чем сам возбудитель в пробе.
РИД – реакция иммунодиффузии в агаровом геле (AGID). Сыворотку и антиген вносят в соседние лунки геля. При встрече образуется линия преципитации, её читают глазом. Оборудование простое, расходов мало.
ВОЗЖ относит РИД к менее распространённым методам выявления антител. Для лейкоза КРС руководство описывает РИД как специфичный, но не очень чувствительный тест для сыворотки отдельных животных. Для молока он непригоден, кроме первого молозива.
Практический вывод: РИД хорошо подтверждает и слабее находит. Когда от серологии по стаду нужна чувствительность, к ней добавляют ИФА или ПЦР.
Иммунохроматографический анализ (ИХА) ставят на тест-полоске или в кассете. ВОЗЖ называет такие устройства point of care, или pen-side tests, и относит их к новым методам выявления антител.
Условия работы ВОЗЖ описывает прямо. Экспресс-тесты применяют в поле при разных условиях среды, на разных типах проб, собранных в нестерильных условиях, операторами с разной подготовкой. Поэтому от теста требуют устойчивости к колебаниям температуры, влажности и освещённости и к квалификации оператора. ВОЗЖ указывает: необходимость подтверждающего исследования и отчётности аккредитованной лаборатории по положительному результату – особенно при исследовании на экзотические болезни – должна быть закреплена в действующих правилах и руководствах по тестированию.
Отсюда и роль ИХА: быстро отобрать животных для дальнейшего исследования, получить предварительную оценку там, где лаборатория далеко. Диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований в порядке, который задают ветеринарные правила.
Классические методы остаются в правилах там, где нужен живой возбудитель или реакция клеточного иммунитета.
Бактериологическое исследование по российским ветправилам включает бактериоскопию, культуральный метод с выделением чистой культуры возбудителя и биологическую пробу. Посеву нужен живой возбудитель – этим он отличается от ПЦР. По Правилам № 534 ПЦР при туберкулёзе применяют как экспресс-тест, но результат обязательно подтверждают бактериологическим исследованием (п. 25).
Аллергическая проба устроена иначе: препарат для диагностики туберкулёза вводят животному и учитывают реакцию. Плановые аллергические исследования проводят, чтобы доказать отсутствие циркуляции возбудителя туберкулёза в хозяйстве (п. 8 Правил № 534).
Гистологическое исследование ищет характерные изменения в тканях. По Правилам № 156 диагноз на лейкоз считается установленным и в том случае, когда такие изменения обнаружены при гистологическом исследовании (п. 21).
Глава 1.1.2 руководства ВОЗЖ начинается с простого тезиса: исследование зависит от качества и пригодности проб. Четыре частые потери:
Сыворотку получают из крови без антикоагулянта: сгустку дают сократиться при комнатной температуре, защищая пробу от жары и холода. Пробы фекалий держат охлаждёнными – в холодильнике при 4 °C или на льду – и исследуют как можно быстрее.
Колостральные антитела у молодняка. Телёнок получает антитела с молозивом. Для лейкоза КРС руководство ВОЗЖ указывает: материнские антитела могут исчезать до 6–7 месяцев, и отличить их от антител активной инфекции серология не позволяет. Активное заражение подтверждает ПЦР на провирус. Телята с колостральными антителами названы в руководстве среди случаев, когда полезна ПЦР по отдельному животному. Правила № 156 сделали это нормой: животных от 15 календарных дней до 6 месяцев включительно исследуют молекулярно-биологическим методом.
Окно до сероконверсии. Диагностическое окно – промежуток между контактом с возбудителем и моментом, когда антитела впервые выявляются. Для вируса лейкоза КРС руководство ВОЗЖ приводит 3–16 недель. Отрицательная серология у недавно заражённого животного ожидаема и болезнь не исключает. У лейкоза вклад вносит и длинный инкубационный период: правила называют срок от 2 месяцев до 6 лет.
Отдельный случай – околородовый период. Антитела уходят из крови коровы в молозиво, и РИД может их не увидеть. Руководство ВОЗЖ не считает окончательным отрицательный результат РИД за 2–6 недель до отёла и 1–2 недели после; исследование повторяют. Правила № 156 решают это сроком отбора: кровь на серологию берут не раньше чем через 14 календарных дней после отёла и не позднее чем за 14 дней до него.
Вакцинные антитела. Серология показывает контакт с антигеном, а его источником бывает вакцина. Правила № 703 требуют указывать в сопроводительном письме дату последней вакцинации, номер серии, наименование и производителя вакцины (п. 23). Эти данные вносят, если их представили владелец животных или ветеринарный специалист. Когда прививок не было, в письме делают отметку об этом. Правила № 156 не разрешают брать кровь на серологию раньше чем через 14 календарных дней после введения живых вакцин или аллергенов (п. 18). Если данные о вакцинации не дошли до лаборатории, результат прочитают неверно.
| Метод | Что выявляет | Проба | Когда применяют |
|---|---|---|---|
| ПЦР в реальном времени | ДНК или РНК возбудителя, в том числе погибшего | по инструкции к набору; для набора на провирус лейкоза КРС – цельная кровь и продукты питания | подтверждение случая; молодняк с колостральными антителами; период до сероконверсии |
| ИФА на антитела | антитела к возбудителю | сыворотка или плазма, в части наборов – объединённые пробы | мониторинг поголовья, скрининг, оценка иммунитета после вакцинации |
| ИФА на антиген | антиген возбудителя | по инструкции к набору | период выделения возбудителя; окно уже, чем у серологии |
| РИД | преципитирующие антитела | сыворотка или плазма | серология там, где метод закреплён правилами; подтверждение |
| ИХА (экспресс-тест) | антитела или антиген | по инструкции к тесту | предварительная оценка в поле; положительный результат подтверждают в лаборатории |
| Бактериологическое исследование | живого возбудителя | патматериал, молоко, секреты по правилам | диагноз на туберкулёз и бруцеллёз |
| Аллергическая проба | реакцию животного на введённый препарат | препарат вводят животному | плановые исследования на туберкулёз (п. 8 Правил № 534) |
| Гематологическое исследование | изменения картины крови | кровь с 10-процентным раствором ЭДТА | лейкоз КРС: у животных старше 6 месяцев после положительной серологии (п. 18 Правил № 156) |
Российские ветеринарные правила часто называют метод прямо. Три примера.
Лейкоз КРС. Правила, утверждённые приказом Минсельхоза России от 24.03.2021 № 156, действуют с 1 сентября 2021 года до 1 сентября 2027 года. Серологические исследования проводят методами ИФА и (или) РИД, молекулярно-биологические – методом ПЦР (п. 20). Метод привязан к возрасту (п. 18). От животных старше 6 месяцев берут 5–7 мл крови без антикоагулянта или с фактором свёртывания – на серологию. От животных от 15 календарных дней до 6 месяцев включительно берут 5–7 мл крови с антикоагулянтом – на молекулярно-биологическое исследование.
Плановую серологию у животных старше 6 месяцев проводят раз в год. На быков-производителей (доноров), коров-доноров эмбрионов и животных-продуцентов это правило не распространяется: животных-продуцентов проверяют 2 раза в год, быков-производителей, используемых в случке, – 3 раза в год (п. 9). Подпункт «а» пункта 9, пункты 18, 19 и 21 действуют в редакции приказа Минсельхоза России от 08.04.2025 № 229 – с 1 сентября 2025 года. Разбор по группам животных – в статье «Лейкоз КРС: РИД, ИФА или ПЦР».
Бруцеллёз. Правила, утверждённые приказом Минсельхоза России от 22.11.2024 № 703, действуют с 1 марта 2025 года до 1 марта 2031 года. Исследования проводят бактериологическим методом, ПЦР и серологическими методами из таблицы № 2 пункта 13 Правил (п. 24). При сомнительном результате серологии кровь берут повторно через 25–45 календарных дней со дня первичного отбора (п. 22). Пробы доставляют в лабораторию в течение 48 часов с момента отбора (п. 23).
Туберкулёз. Правила, утверждённые приказом Минсельхоза России от 08.09.2020 № 534, действуют с 1 марта 2021 года до 1 марта 2027 года. Для доказательства отсутствия циркуляции возбудителя проводят плановые аллергические исследования (п. 8 в редакции приказа Минсельхоза России от 02.11.2022 № 777, действует с 1 марта 2023 года). Методы лабораторного исследования – бактериологические, включая бактериоскопический, культуральный и биологическую пробу, а также ПЦР (п. 25). ПЦР применяют для идентификации возбудителя при бактериологическом исследовании и как экспресс-тест с обязательным подтверждением бактериологическими исследованиями. Отрицательный результат ПЦР окончательным не считают. Пробы доставляют в лабораторию в течение 72 часов с момента отбора (п. 24).
Разницу между методами удобно увидеть на одной болезни. Для лейкоза КРС в каталоге есть наборы под все три метода, которые называют Правила № 156:
Разделы каталога устроены по методу. В разделе ПЦР – более 130 наборов собственного производства, более 100 из них для выявления возбудителей болезней животных, птицы, рыб и пчёл. Фасовка у большинства – 55 и 110 реакций. В разделе ИФА – свыше 110 наборов ID.vet для серологической диагностики и контрольные сыворотки ID.vet. Отдельно собраны тест-полоски ИХА и весь каталог.
Подобрать наборы под задачи и оборудование лаборатории помогут специалисты ВЕТ ФАКТОР: +7 (495) 789-48-11, vet@faktor.ru.
ПЦР ищет генетический материал возбудителя, ИФА – антитела к нему или его антиген. ПЦР отвечает на вопрос «возбудитель здесь», серология – «организм с ним встречался». Серология не отличает перенесённую инфекцию от вакцинации, а ПЦР выявляет нуклеиновую кислоту и погибших микроорганизмов.
Частая причина – колостральные антитела. По данным ВОЗЖ, материнские антитела к вирусу лейкоза КРС могут сохраняться до 6–7 месяцев, а заражения при этом нет. Поэтому Правила № 156 для животных от 15 календарных дней до 6 месяцев включительно предписывают молекулярно-биологическое исследование.
Нет. ВОЗЖ указывает: необходимость подтверждающего исследования и отчётности аккредитованной лаборатории по положительному результату – особенно при исследовании на экзотические болезни – должна быть закреплена в правилах тестирования. Диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований в порядке, установленном ветеринарными правилами по конкретной болезни.
Правила № 703 предусматривают повторный отбор проб крови через 25–45 календарных дней со дня первичного отбора (п. 22). Решение о дальнейших действиях принимает госветслужба.
Чтобы по срокам отличить поствакцинальные антитела от антител после заражения. Правила № 703 требуют указать в сопроводительном письме дату последней вакцинации, номер серии, наименование и производителя вакцины (п. 23). Эти сведения вносят, если их представил владелец животных или ветеринарный специалист. Отсутствие прививок тоже отмечают. Правила № 156 задают и срок отбора: не раньше чем через 14 календарных дней после введения живых вакцин или аллергенов (п. 18).
Материал носит справочный характер и не заменяет ветеринарные правила и заключение ветеринарного специалиста. Диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований в порядке, установленном законодательством.
© 2015 – 2026 ООО «ВЕТ ФАКТОР» Все права защищены.
