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Maladies respiratoires des porcs: comment assembler le tableau de bord des PCR et de l'ELISA

01.10.2026 10:00:00

Maladies respiratoires des porcs: comment assembler le tableau de bord des PCR et de l'ELISA

La toux de l'élevage et de l'alimentation est rarement causée par un seul agent. La pathologie réspirative des cochons se forme immédiatement avec les virus et les bactéries, de sorte que les tests sont organisés en fonction de l'âge du groupe et de la tâche consistant à extraire l'éclair ou à surveiller le troupeau. Voyons quels sont les échantillons d'information pour chaque agent, ce que montrent les PCR et l'ELISA séparément, et comment ne pas accepter les anticorps post-occinals pour une infection.

Système de réspiration: pourquoi plusieurs agents sont recherchés

Cochon toux et quelques agents respiratoires autour d'elle

Респираторную патологию свиней описывают как респираторный комплекс (porcine respiratory disease complex, PRDC). Он полимикробный: болезнь возникает от разных сочетаний первичных и вторичных возбудителей. В обзоре Opriessnig и соавторов в число частых участников входят вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), вирус гриппа свиней, цирковирус свиней 2 типа (ЦВС-2), Mycoplasma hyopneumoniae и Pasteurella multocida.

Les combinaisons changent la gravité de la maladie. Toujours selon l'étude, la contamination commune des centres de coordination centrale et centrale 2 et des M. L'hyopneumoniae, qui n'est pas infectieuse individuellement, cause une maladie respiratoire grave.

Le tableau clinique ne fait pas apparaître ces infections. Les dirigeants de l'Organisation mondiale de la santé animale (OMSA, WOAH) disent clairement que la grippe porcine est indéterminée par le RGSS, la maladie d'Aüesca, le coronavirus respiratoire des porcs, la pleppneumonie actinobacillose et la mycoplasmose, ce qui nécessite des études de laboratoire. D'où la conclusion pratique: un panneau, pas un test.

L'âge nous dit qui chercher en premier

Trois cochons d'âge différent: aspirateur, élevage et alimentation

L'âge du groupe réduit la liste. Dans une étude de 2021, on a prélevé des frottis trachéobronchiaux sur des porcs présentant des symptômes respiratoires en Belgique et aux Pays - Bas. Pourcentage positif pour M. L'hyopneumoniae a augmenté avec l'âge: 8,5% en 3 à 5 semaines, 16,2% en 6 à 11 semaines et 53,4% à l'alimentation.

ÂgeCe qu'on trouve le plus souvent (pourcentage d'échantillons positifs)
3 à 5 semainesVirus de la grippe A: 28,4%, cytomégalolirus porcin: 18,2%, A. pleuropneumoniae: 24,7%, PRRSV-1: 11,5%
6 à 11 semainesA. pleuropneumoniae: 32,1%, cytomégaloïrus porcin: 26,7%, PRRSV-1: 25,5%, virus de la grippe A: 20,5%, CBA-2: 11,4%
AlimentationM. hyopneumoniae: 53,4%

Le plus souvent, les paires d'un échantillon se trouvaient dans le RRSS et la mycoplasmose, le RGSS et la grippe, le RGSS et le CBA-2, la mycoplasmose et la grippe. Parmi les triples combinaisons, les RRSS + M prédominaient. Hyopneumoniae + virus de la grippe A et RSSA + M. hyopneumoniae + CBA-2. Ce sont les résultats d'une étude de cas, pas la norme, mais ils montrent la logique: les cochons sont les premiers à tester les virus et à les nourrir avec la mycoplasmose.

Flash ou surveillance: deux panneaux différents

L'objectif est défini à la fois par le matériel et la méthode.

FlashSurveillance du troupeau
Qui est étudié ?Cliniques et animaux mortsÉchantillonnage par âge
Type d’échantillonpoumons, amandes, ganglions lymphatiques, sang, frottis dans les voies respiratoires inférieuresSérum, liquide de bouche, frottis trachés, jus de viande
MéthodePCR par agentELISA pour les anticorps plus PCR par échantillonnage
Qu'est-ce qu'ils reçoivent ?confirmation du casSéroprophylaxie et âge de la contamination

La sérologie dans une situation d'urgence n'aide guère: les anticorps apparaissent plus tard que les signes. Les PCR sont également limités dans le cadre de la surveillance systématique: ils ne capturent un agent qu'au moment de la sélection.

Mycoplasma hyopneumoniae: Où rechercher l'ADN

Schéma de la trachée et du cochon avec un frottis provenant des voies respiratoires

Le microplasme colonise la trachée et le bronchage cinétiques, et les matériaux s'approchent du lieu de l'infection. Toutefois, le fait d'être plus profond ne signifie pas qu'il est sensible. D'après les données fournies par Oh et les auteurs, les frottis de la gorge étudiés par les PCR sont supérieurs aux frottis nasaux et au lavage trachéobronchial. Les cochons utilisent des frottis pour déterminer si l'agent est transmis par les truies.

Pour la surveillance, les échantillons de trachéole sont mélangés dans des réservoirs. Selon les calculs de 2024, la sensibilité du PCR était de 0,96 pour un réservoir de trois échantillons, 0,95 pour un réservoir de cinq et 0,93 pour un réservoir de dix. La pulsation réduit le coût de la recherche, et elle reste le principal obstacle aux programmes de surveillance.

La sérologie complète les PCR, mais répond à une autre question: le groupe a-t-il rencontré l'agent?

Actinobacillus pleuropneumoniae: Amandes, poumons et sérotypes

Amandes et poumons en tant que matières pour les PCR et tablettes d'ELISA pour le sérotype

La matière dépend de qui elle est étudiée. Les animaux qui sont tombés ont des tissus pulmonaires endommagés, des amygdales, des ganglions bronchiaux et des lymphoses circulatoires. Des prélèvements sur les muqueuses et les amygdales sont pratiqués sur les vivants. Selon la description du kit PCR-APP-FAKTOR, chez les animaux bactérioniques sains, l'agent est retiré des amandes de 3 à 4 mois après leur rétablissement.

Il y a 19 sérotypes pour les glucides de surface, principalement la capsule. Les sérotypes 1, 5, 9, 11 et 16 sont considérés comme les plus virulents en raison des toxines d'Apxi et d'ApxII. Le sérotype est important pour le vaccin bactérien. En raison des réactions croisées et de la faible reproductibilité des techniques sérologiques, le sérotype est déterminé moléculairement.

La série des troupeaux montre une autre chose: si un contact a eu lieu. Dans l'expérience des cochons infectés par des sérotypes 1 et 7, les anticorps ont été détectés entre les 14 et 56 jours, et la réponse à la toxine d'ApxIV a pris encore 14h21 jours. Cela devrait être pris en compte lors de la sélection du sérum.

RGSS: PCR des victimes et séroprospection du troupeau

Échantillonnages de sang et de sérum pour les PCR et l'ELISA dans le cadre du RGSS

La forme réspirative du RSSA se manifeste par l'érection, la fièvre, le manque de nourriture et la faiblesse. Les jeunes porcs sont plus malades; Chez les cochons et les truies, l'infection est souvent subclinique.

D'après les directives de l'OMSF, après l'infection, des vicémies et des infections pulmonaires se développent: chez les jeunes porcins, ils restent des semaines, chez les adultes pendant plusieurs jours. Le sérum et le lavabo bronchoalvéolaire sont donc les meilleurs moyens de détecter le virus. Les PCR s'appliquent aux tissus et au sérum; Le liquide de la bouche est approprié pour le diagnostic d'extraction, tandis que les troupeaux tribaux sont équipés d'un processus de traitement des fluides: l'exsume des tissus collectés lors de la castration et de l'arrosage des résidus. Contrainte importante: Le PCR ne distingue pas le virus infectieux d'un virus activé.

Les anticorps du virus RGSS sont détectés à partir de 7 ou 14 jours après l'infection, le maximum atteint 30 ou 50 jours et une partie des porcs devient séronégatif dans 3 ou 6 mois. Un seul échantillon de sérum est donc peu informatif: les anticorps maternels et la vaccination passée influent sur le résultat. Les anticorps maternels ont une période de 12 à 14 jours et sont généralement détectés jusqu'à 4 à 8 semaines après la naissance. Les cochons séroconvertissent à partir de 3 ou 6 semaines. Pour montrer une infection récente, on étudie des échantillons de vapeur: le sérum aigu et le sérum reconvalescent.

Les procédures de suspicion sont définies. Règles vétérinaires relatives au RHSS, approuvées par l'ordonnance ministérielle no 625 du 26 octobre 2020. Ils sont en vigueur jusqu'au 1er septembre 2032.

  1. Владелец в течение 24 часов сообщает о подозрении должностному лицу регионального органа ветеринарии или подведомственной ему организации (п. 10 Правил № 625).
  2. Пробы отбирают по объёму группы: при поголовье до 50 голов от 15 свиней, при 51–100 от 22, при 101–500 от 25, при 501 и более от 30 (п. 16).
  3. Les porcs vivants à haute température prennent 3 à 5 ml de sang. Les cadavres (trois au maximum) prennent des fragments de rate et de poumons de 5 à 10 g, des excréments de la cavité thoracique, des lymphoses circulatoires. Le fruit avorté est expédié en entier (p. 16).
  4. La lettre d'accompagnement indique la date de la dernière vaccination, le numéro de série et le fabricant du vaccin (p. 17).
  5. La recherche consiste à séparer le virus de la culture cellulaire, des PCR et de l'ELISA (p. 19).

Le diagnostic est considéré comme établi lorsque l'agent injecteur a été identifié, que son matériel génétique a été détecté ou que des anticorps non vaccinés ont été découverts (p. 18). Cette dernière réserve détermine la valeur des vaccinations dans la lettre d'accompagnement.

Gripp A et CBA-2: fenêtre étroite et nombre d'ADN

Heures de 24 et 72 heures et courbe en temps réel des PCR

У гриппа окно для ПЦР короткое. Признаки и выделение вируса с носовой слизью начинаются уже через сутки после заражения, а выделение обычно прекращается к 7–10-м суткам. Руководство ВОЗЖ рекомендует отбирать пробы в течение 24–72 часов после появления признаков и брать материал от нелеченого животного в острой фазе. РНК ищут в трахее, лёгких и носовых мазках. Пробы везут охлаждёнными на льду, не замораживая. Заболеть при гриппе способно всё поголовье группы, смертность обычно низкая, но вторичные бактерии утяжеляют картину.

La sérologie de la grippe répond à une question sur les contacts passés. Historiquement, le test principal a été le RTGA sur des sérums à vapeur pris à intervalles de 10 à 21 jours; La croissance du titre est quatre fois plus importante que celle de l'infection récente.

CBC-2 est une autre complexité: le virus est très répandu, et le fait qu'il ait été détecté ne signifie pas grand chose. La quantité est importante. Dans le travail expérimental, 7 log10 copies de génomes par millilitre de sérum et plus étaient considérées comme des spiritueux. La maladie systémique a été confirmée par une combinaison de trois conditions. Premièrement, perte de masse. Deuxièmement, épuisement modéré ou marqué du lymphoide avec inflammation granulaire du tissu lymphatique. Troisièmement, une quantité modérée ou élevée d'acide nucléique CBC-2 dans ces tissus hybrides in situ. C'est pourquoi les PCR positifs du centre CBA-2 lisent en même temps que la peinture clinique et la pathomorphologie.

Maladie d'Aueski: le gE-AFA sépare l'infection de la vaccination

Planchette ELISA: un animal a des anticorps gE, il n'en a pas.

Свиньи, перенёсшие болезнь Ауески, остаются латентно инфицированными; исключение составляют поросята младше двух недель, которые гибнут от энцефалита. Латентных и субклинически заражённых животных выявляют серологией, а не выделением возбудителя. Антитела появляются на 7–10-е сутки после заражения.

Les vaccins marqués sont dépourvus d'un seul glycocrotéine, le plus souvent gE. Un animal infectieux vacciné ne donne pas d'anticorps à gE, mais un virus. C'est sur cette base que repose le principe DIVA. D'autres tests permettent d'évaluer le niveau d'immunité post-occinal: gB-ELISA, latex-agglutination ou neutralisation du virus. Des PCR ont également été élaborés en temps réel pour distinguer le virus vaccinal gE et le virus sauvage gB et gE.

Règlement vétérinaire sur la maladie d'Aueski, tels qu'ils ont été approuvés par l'ordonnance ministérielle no 540 du 14 septembre 2020, sont valables jusqu'au 1er mars 2027. Les animaux vivants se font lécher dans la bouche et le nez, 5 ml de sang avec un anticoagulant et 5 ml sans ce produit (p. 18). Les corps proviennent de fragments d'organes parenchimateux et/ou du cerveau de 5 à 10 g, et/ou des ganglions lymphatiques entiers et/ou des amygdales (p. 18). Les échantillons doivent être livrés au laboratoire dans les 12 heures suivant la sélection (p. 19).

Le diagnostic est établi dans l'un des cinq cas (p. 21). L'agent ionisant a été enlevé ou son matériel génétique n'appartenant pas aux souches de vaccin a été détecté. Les résultats de l'essai biologique ont été positifs. On a trouvé des anticorps qui ne sont pas liés à la vaccination. Enfin, des anticorps ont été détectés chez des animaux atteints d'un vaccin étiqueté gE. Ce dernier cas est important pour la pratique: le gE-AFA positif dans un troupeau vacciné sert de base à un diagnostic et non pas de piste.

Bactéries secondaires: Pasterellose et bordel

Pasteurella multiocida et Bordetella bronchiseptica sont plus susceptibles de passer par la deuxième couche, avec des muqueuses déjà endommagées. Le PCR les trouve rapidement, mais il n'y a pas assez de PCR pour le diagnostic.

Règles vétérinaires pour la pasterellose, утверждённые приказом Минсельхоза России от 31.10.2022 № 770, действуют с 1 марта 2023 года до 1 марта 2029 года. Диагноз считают установленным, если возбудитель выделен и идентифицирован (п. 21). Методы: бактериологическое исследование либо ПЦР с определением патогенности возбудителя биологической пробой (п. 20). От животных берут 2–5 мл крови и слизь из носовой полости; патматериал отбирают, если с момента гибели прошло не более 5 часов (п. 18). Пробы доставляют в течение 24 часов (п. 19).

Comment ne pas prendre les anticorps pour une infection

La sérologie du troupeau est lue en même temps que le programme de vaccination. Quatre règles pratiques:

  • La maladie d'Aueski. При маркированных вакцинах без gE используют gE-ИФА как DIVA-тест; для оценки иммунитета берут gB-ИФА или нейтрализацию.
  • RGSS. L'ELISA ne partage pas les anticorps ni les anticorps de campagne. Une infection récente montre la séroconversion dans les échantillons de vapeur, et confirme le PCR.
  • Gripp A. Un seul résultat positif n'indique qu'un contact avec un virus ou un vaccin. La récente infection montre que le titre de la RTGA a quadruplé sur les sérums.
  • La pleurnicherie. Les tests sérographiaux et les tests d'AppxIV donnent des informations différentes; Les délais de sélection du sérum doivent correspondre à la date d'infection.

Les données relatives à la vaccination ne sont pas une formalité: elles sont indiquées dans la lettre d'accompagnement des échantillons du Règlement no 625 (p. 17) et le laboratoire s'en sert pour interpréter le résultat.

Échantillonnage et livraison: ce que les réglementations vétérinaires exigent

Thermos glacé et montres: 12, 24 et 48 heures pour la livraison des échantillons

Les délais de livraison varient selon les maladies, ce qui est le plus souvent un échec.

Maladie (document)Principaux échantillons suspectsDélai de livraison au laboratoire
RGSS (ordonnance no 625)Le sang de 3 à 5 ml des vivants; rate et poumons de 5 à 10 g, exsumés de la cavité thoracique, lymphoses circulatoires des cadavres48 heures (p. 17)
Maladie d'Aueski (ordonnance no 540)Lave-toi de la bouche et du nez, sang de 5 ml avec anticoagulants et 5 ml sans.12 heures (p. 19)
Pasterellóz (ordonnance no 770)Sang de 2 à 5 ml, mucus de l'abdomen; Le pathogène est pris dans les 5 heures suivant la mort.24 heures (p. 19)

Les prescriptions générales sont les mêmes: les échantillons doivent être refroidis, placés dans un thermos ou un refroidisseur pendant le transport, et les conteneurs scellés. Afin de détecter le virus du RGS, la direction recommande que le matériau soit refroidi jusqu'à 4 °C immédiatement après la sélection et livré dans les 24 à 48 heures.

Outil d'analyse des maladies respiratoires chez les porcs

PCR en temps réel:

  • PCR-MYCOPLASMOSIS-HYOP-FAKTOR (cat. No D52725-VET): ADN M. hyopneumoniae. Matériau: Frottis trachéobronchiaux, légumineuses bronchoalvéolaires, tissus pulmonaires et, dès les premiers stades de l'épreuve, frottis à l'amygdale, amandal, rotoglue et cavité nasale.
  • PCR-APP-FAKTOR (cat. No D18919-VET): ADN A. pleuropneumoniae. Matériau: Frottis rotatifs et amygdales, tissus pulmonaires abîmés, amandes, lymphoses bronchiales et lymphatiques.
  • PCR-PRRS-FAKTOR (cat. No R13117-VET): ARN du virus de la RGSS. Matériau: plasma et sérum sanguin, fragments de tissus et d'organes, sperme, placenta et foetus provenant d'animaux avortés.
  • PCR-CIRCOVIRUS-2-FAKTOR (cat. No D13017-VET): ADN CBA-2. Matériau: sérum sanguin, fécales, sperme, fruits avortés, placenta, organes d'animaux tombés.
  • PCR-INFLUENZA-A-FAKTOR (cat. No R10515-VET): ARN du virus de la grippe A. Matériau: Frottis à la gorge et à la trachée, fragments d'organes internes et autres échantillons de l'ensemble.
  • PCR-AUJESZKY-DIFF-FAKTOR (cat. No D54026-VET): ADN du virus d'Aueski, avec différenciation des souches de vaccins (gE) marquées.
  • PCR-PASTEURELLOSIS-FAKTOR (cat. No D19319-VET) et PCR-BORDETELLOSIS-FAKTOR (cat. No D15618-VET): ADN P. multocida et B. bronchiseptica.

ELISA ID.vet:

Pour l’extraction des acides nucléiques avant la PCR : DNA/RNA-S-FAKTOR (cat. № EDR001-VET).

Les spécialistes de VET FAKTOR vous aident à choisir les kits adaptés aux besoins et à l’équipement de votre laboratoire : +7 (495) 789-48-11, vet@faktor.ru.

Questions fréquentes

Quel genre de matière vivante prend-elle sur la mycoplasme ?

L'excitation colonise la trachée éphémère et les bronches, c'est pourquoi elle est prélevée sur les voies respiratoires. D'après les données fournies par Oh et les auteurs, les frottis de la gorge sont plus sensibles aux PCR et aux frottis nasaux et au lavage trachéobronchial au début de l'exposition.

Les échantillons peuvent-ils être combinés avec des balles ?

Pour les échantillons de trachéole sur M. hypopneumoniae a été étudiée. La réponse calculée était de 0,96 pour un réservoir de trois échantillons, 0,95 pour un réservoir de cinq, 0,93 pour un réservoir de dix. Les balles réduisent le coût de la surveillance, même si la sensibilité diminue légèrement.

Le gE-AFA positif chez les porcs vaccinés peut-il être une trace d'un vaccin ?

Нет, если применялась маркированная вакцина без gE. По п. 21 Правил № 540 обнаружение антител к гликопротеину gE у животных, привитых маркированной вакциной, входит в число оснований считать диагноз на болезнь Ауески установленным.

Combien de temps après l'apparition de la toux pour les tests de grippe ?

D'après les directives de l'organisation, les échantillons sont prélevés dans un délai de 24 à 72 heures après l'apparition des signes d'un animal incurvé en phase aiguë. La séparation du virus s'arrête généralement à 7 ou 10 jours, et le PCR peut être négatif plus tard si une infection a été effectivement infectée.

Est-ce que le PCR est suffisant pour diagnostiquer la pasteurellose ?

Нет. По п. 21 Правил № 770 диагноз считается установленным, если возбудитель выделен и идентифицирован. ПЦР по п. 20 применяют вместе с определением патогенности возбудителя биологической пробой.

Sources

Ce document est fourni à titre informatif et ne remplace ni les règles vétérinaires ni l’avis d’un professionnel vétérinaire. Le diagnostic est établi à partir des résultats des analyses de laboratoire, selon la procédure prévue par la législation.


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