Респираторную патологию свиней описывают как респираторный комплекс (porcine respiratory disease complex, PRDC). Он полимикробный: болезнь возникает от разных сочетаний первичных и вторичных возбудителей. В обзоре Opriessnig и соавторов в число частых участников входят вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), вирус гриппа свиней, цирковирус свиней 2 типа (ЦВС-2), Mycoplasma hyopneumoniae и Pasteurella multocida.
Сочетания меняют тяжесть болезни. По тому же обзору, совместное заражение ЦВС-2 и M. hyopneumoniae, которые по отдельности малопатогенны, даёт тяжёлую респираторную болезнь.
Клиническая картина не разводит эти инфекции. Руководство Всемирной организации здравоохранения животных (ВОЗЖ, WOAH) прямо говорит: грипп свиней неотличим по признакам от РРСС, болезни Ауески, респираторного коронавируса свиней, актинобациллёзной плевропневмонии и микоплазмоза, поэтому нужны лабораторные исследования. Отсюда практический вывод: панель, а не один тест.
Возраст группы сужает список. В исследовании 2021 года трахеобронхиальные мазки брали у свиней с признаками респираторной болезни в хозяйствах Бельгии и Нидерландов. Доля положительных на M. hyopneumoniae росла с возрастом: 8,5% в 3–5 недель, 16,2% в 6–11 недель и 53,4% на откорме.
| Возраст | Что находили чаще (доля положительных проб) |
|---|---|
| 3–5 недель | вирус гриппа А: 28,4%, цитомегаловирус свиней: 18,2%, A. pleuropneumoniae: 24,7%, PRRSV-1: 11,5% |
| 6–11 недель | A. pleuropneumoniae: 32,1%, цитомегаловирус свиней: 26,7%, PRRSV-1: 25,5%, вирус гриппа А: 20,5%, ЦВС-2: 11,4% |
| Откорм | M. hyopneumoniae: 53,4% |
Чаще всего в одной пробе встречались пары: РРСС и микоплазмоз, РРСС и грипп, РРСС и ЦВС-2, микоплазмоз и грипп. Из тройных сочетаний преобладали РРСС + M. hyopneumoniae + вирус гриппа А, а также РРСС + M. hyopneumoniae + ЦВС-2. Это данные конкретного исследования, а не норматив, но они показывают логику: у поросят до отъёма первыми проверяют вирусы, а на откорме начинают с микоплазмоза.
Задача определяет и материал, и метод.
| Вспышка | Мониторинг стада | |
|---|---|---|
| Кого исследуют | клинически больных и павших животных | плановые выборки по возрастным группам |
| Материал | лёгкие, миндалины, лимфоузлы, кровь, мазки из нижних дыхательных путей | сыворотка, ротовая жидкость, трахеальные мазки, мясной сок |
| Метод | ПЦР на возбудителя | ИФА на антитела плюс ПЦР выборочно |
| Что получают | подтверждение случая | серопрофиль и возраст заражения |
Серология в острой ситуации помогает слабо: антитела появляются позже признаков. ПЦР в плановом надзоре тоже ограничена: она ловит возбудителя только в момент выделения.
Микоплазма колонизирует реснитчатый эпителий трахеи и бронхов, и материал берут ближе к месту инфекции. При этом «глубже» не означает «чувствительнее». По данным, которые приводят Oh и соавторы, на ранних сроках заражения мазки из гортани, исследованные ПЦР, превосходят и носовые мазки, и трахеобронхиальный лаваж. У подсосных поросят гортанные мазки применяют, чтобы оценить, передаётся ли возбудитель от свиноматок.
Для надзора трахеальные пробы объединяют в пулы. По расчётам 2024 года, чувствительность ПЦР составила 0,96 для пула из трёх проб, 0,95 для пула из пяти и 0,93 для пула из десяти. Пулирование снижает стоимость исследования, а она остаётся главным ограничением программ надзора.
Серология дополняет ПЦР, но отвечает на другой вопрос: встречалась ли группа с возбудителем.
Материал зависит от того, кого исследуют. От павших животных берут поражённую лёгочную ткань, миндалины, бронхиальные и средостенные лимфоузлы. От живых берут мазки со слизистых ротоглотки и миндалин. По описанию набора ПЦР-АПП-ФАКТОР, у здоровых животных-бактерионосителей возбудитель выделяется из миндалин 3–4 месяца после выздоровления.
Выделяют 19 серотипов по поверхностным углеводам, прежде всего по капсуле. Серотипы 1, 5, 9, 11 и 16 относят к наиболее вирулентным из-за токсинов ApxI и ApxII. Серотип важен для подбора бактериновой вакцины. Из-за перекрёстных реакций и низкой воспроизводимости серологических методов серотип определяют молекулярно.
Серология стада показывает другое: был ли контакт. В эксперименте у свиней, заражённых серотипами 1 и 7, антитела к липополисахариду выявлялись с 14-х по 56-е сутки, а ответ на токсин ApxIV запаздывал ещё на 14–21 день. Это стоит учитывать при выборе срока отбора сыворотки.
Респираторная форма РРСС проявляется одышкой, лихорадкой, отказом от корма и вялостью. Молодые свиньи болеют тяжелее; у хряков и неосеменённых свиноматок инфекция часто протекает субклинически.
По руководству ВОЗЖ, после заражения развиваются виремия и инфекция лёгких: у молодых свиней они держатся неделями, у взрослых несколько дней. Поэтому для выявления вируса лучше всего подходят сыворотка и бронхоальвеолярный лаваж. ПЦР применяют к тканям и сыворотке; для загонной диагностики подходит ротовая жидкость, а в племенных стадах подходят processing fluids: экссудат тканей, собранных при кастрации и купировании хвостов. Важное ограничение: ПЦР не отличает инфекционный вирус от инактивированного.
Антитела к вирусу РРСС связывающие тесты выявляют уже с 7–14-х суток после заражения, максимума титры достигают к 30–50-м суткам, а часть свиней становится серонегативной через 3–6 месяцев. Единичная проба сыворотки поэтому малоинформативна: на результат влияют материнские антитела и прошлая вакцинация. Материнские антитела имеют период полужизни 12–14 дней и обычно выявляются до 4–8 недель после рождения. Поросята от серопозитивных свиноматок в заражённой среде сероконвертируют с 3–6 недель. Чтобы показать свежую инфекцию, исследуют парные пробы: сыворотку острого периода и реконвалесцентную.
Порядок действий при подозрении задают Ветеринарные правила по РРСС, утверждённые приказом Минсельхоза России от 26.10.2020 № 625. Они действуют до 1 сентября 2032 года.
Диагноз считается установленным, если выделен возбудитель, обнаружен его генетический материал или найдены антитела, не связанные с вакцинацией (п. 18). Последняя оговорка и определяет ценность сведений о прививках в сопроводительном письме.
У гриппа окно для ПЦР короткое. Признаки и выделение вируса с носовой слизью начинаются уже через сутки после заражения, а выделение обычно прекращается к 7–10-м суткам. Руководство ВОЗЖ рекомендует отбирать пробы в течение 24–72 часов после появления признаков и брать материал от нелеченого животного в острой фазе. РНК ищут в трахее, лёгких и носовых мазках. Пробы везут охлаждёнными на льду, не замораживая. Заболеть при гриппе способно всё поголовье группы, смертность обычно низкая, но вторичные бактерии утяжеляют картину.
Серология гриппа отвечает на вопрос о прошлом контакте. Исторически основным тестом была РТГА на парных сыворотках, взятых с интервалом 10–21 день; рост титра в четыре раза и более указывает на недавнюю инфекцию.
С ЦВС-2 сложность другая: вирус широко распространён, и сам факт его обнаружения мало что значит. Значение имеет количество. В экспериментальной работе высокой виремией считали 7 log10 копий генома на миллилитр сыворотки и выше. Системную болезнь подтверждали сочетанием трёх условий. Первое: потеря массы. Второе: умеренное или выраженное лимфоидное истощение с гранулематозным воспалением лимфоидной ткани. Третье: умеренное либо высокое количество нуклеиновой кислоты ЦВС-2 в этих тканях по гибридизации in situ. Поэтому положительную ПЦР на ЦВС-2 читают вместе с клинической картиной и патоморфологией.
Свиньи, перенёсшие болезнь Ауески, остаются латентно инфицированными; исключение составляют поросята младше двух недель, которые гибнут от энцефалита. Латентных и субклинически заражённых животных выявляют серологией, а не выделением возбудителя. Антитела появляются на 7–10-е сутки после заражения.
Маркированные вакцины лишены одного гликопротеина, чаще всего gE. Привитое неинфицированное животное не даёт антител к gE, а инфицированное даёт. На этом и строится принцип DIVA. Уровень поствакцинального иммунитета оценивают другими тестами: gB-ИФА, латекс-агглютинацией или нейтрализацией вируса. Разработаны и ПЦР в реальном времени, различающие gE-делетированный вакцинный вирус и дикий по генам gB и gE.
Ветеринарные правила по болезни Ауески, утверждённые приказом Минсельхоза России от 14.09.2020 № 540, действуют до 1 марта 2027 года. От живых животных берут смывы из ротовой и носовой полостей, 5 мл крови с антикоагулянтом и 5 мл без него (п. 18). От трупов берут фрагменты паренхиматозных органов и (или) головного мозга по 5–10 г, и (или) лимфоузлы целиком, и (или) миндалины (п. 18). Пробы доставляют в лабораторию в течение 12 часов с момента отбора (п. 19).
Диагноз устанавливают в одном из пяти случаев (п. 21). Выделен возбудитель или обнаружен его генетический материал, не относящиеся к вакцинным штаммам. Получен положительный результат биопробы. Найдены антитела, не связанные с прививкой. Наконец, у животных, привитых маркированной вакциной, обнаружены антитела к гликопротеину gE. Последний случай важен для практики: положительный gE-ИФА в привитом стаде служит основанием для диагноза, а не поствакцинальным следом.
Pasteurella multocida и Bordetella bronchiseptica чаще идут вторым слоем, по уже повреждённой слизистой. ПЦР находит их быстро, но для пастереллёза одной ПЦР для диагноза мало.
Ветеринарные правила по пастереллёзу, утверждённые приказом Минсельхоза России от 31.10.2022 № 770, действуют с 1 марта 2023 года до 1 марта 2029 года. Диагноз считают установленным, если возбудитель выделен и идентифицирован (п. 21). Методы: бактериологическое исследование либо ПЦР с определением патогенности возбудителя биологической пробой (п. 20). От животных берут 2–5 мл крови и слизь из носовой полости; патматериал отбирают, если с момента гибели прошло не более 5 часов (п. 18). Пробы доставляют в течение 24 часов (п. 19).
Серология в привитом стаде читается только вместе со схемой вакцинации. Четыре практических правила:
Сведения о вакцинации не формальность: по Правилам № 625 их указывают в сопроводительном письме к пробам (п. 17), и лаборатория опирается на них при трактовке результата.
Сроки доставки различаются по болезням, и это чаще всего подводит.
| Болезнь (документ) | Основные пробы при подозрении | Срок доставки в лабораторию |
|---|---|---|
| РРСС (приказ № 625) | кровь 3–5 мл от живых; селезёнка и лёгкие 5–10 г, экссудат грудной полости, средостенные лимфоузлы от трупов | 48 часов (п. 17) |
| Болезнь Ауески (приказ № 540) | смывы из ротовой и носовой полостей, кровь 5 мл с антикоагулянтом и 5 мл без него | 12 часов (п. 19) |
| Пастереллёз (приказ № 770) | кровь 2–5 мл, слизь из носовой полости; патматериал берут не позже 5 часов после гибели | 24 часа (п. 19) |
Общие требования одинаковы: пробы охлаждают, на время перевозки помещают в термос со льдом или охладителем, контейнеры опечатывают. Для выделения вируса РРСС руководство ВОЗЖ советует охладить материал до 4 °C сразу после отбора и доставить за 24–48 часов.
ПЦР в реальном времени:
ИФА ID.vet:
Для выделения нуклеиновых кислот перед ПЦР: ДНК/РНК-С-ФАКТОР (кат. № EDR001-VET).
Подобрать наборы под задачи и оборудование лаборатории помогут специалисты ВЕТ ФАКТОР: +7 (495) 789-48-11, vet@faktor.ru.
Возбудитель колонизирует реснитчатый эпителий трахеи и бронхов, поэтому берут пробы из дыхательных путей. По данным, которые приводят Oh и соавторы, на ранних сроках заражения мазки из гортани превосходят по чувствительности ПЦР и носовые мазки, и трахеобронхиальный лаваж.
Для трахеальных проб на M. hyopneumoniae пулирование изучено. Расчётная чувствительность составила 0,96 для пула из трёх проб, 0,95 для пула из пяти, 0,93 для пула из десяти. Пулы снижают стоимость надзора, хотя чувствительность немного падает.
Нет, если применялась маркированная вакцина без gE. По п. 21 Правил № 540 обнаружение антител к гликопротеину gE у животных, привитых маркированной вакциной, входит в число оснований считать диагноз на болезнь Ауески установленным.
По руководству ВОЗЖ, пробы берут в течение 24–72 часов после появления признаков, от нелеченого животного в острой фазе. Выделение вируса обычно прекращается к 7–10-м суткам, и позже ПЦР может быть отрицательной при действительно перенесённой инфекции.
Нет. По п. 21 Правил № 770 диагноз считается установленным, если возбудитель выделен и идентифицирован. ПЦР по п. 20 применяют вместе с определением патогенности возбудителя биологической пробой.
Материал носит справочный характер и не заменяет ветеринарные правила и заключение ветеринарного специалиста. Диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований в порядке, установленном законодательством.
© 2015 – 2026 ООО «ВЕТ ФАКТОР» Все права защищены.
